Proizvodi

Monogalaktopiranozidi fluoresceina i fluorescein metil estera: sinteza, enzimska hidroliza biotniliranom β-galaktozidazom i određivanje koeficijenta translacijske difuzije

Fluorescein monoglikozidi (d-galaktopiranozid (FMG) i d-glukopiranozid) i njihov metil ester (MFMG) pripremljeni su od acetobromoglukoze/galaktoze i fluorescein metil estera u dobrim prinosima.Izvedeni su eksperimenti enzimske hidrolize (koristeći biotiniliranu β-galaktozidazu) galakto derivata i izračunati kinetički parametri.Tokom hidrolize primećeno je povećanje intenziteta fluorescencije 15-20 puta.Uočeno je linearno povećanje fluorescencije u kratkom vremenu i niskoj koncentraciji supstrata, što ove spojeve čini korisnim i osjetljivim sondama za galaktozidaze.Veličina Michaelis-Menten konstante (Km) za MFMG je veća od one za FMG što sugerira moguću konformacijsku promjenu fluorogenog supstrata.Vrijednost Km za biotinilirani β-Gal sa FMG je niža od one za nativni enzim.Ovo zapažanje ukazuje na veći supstratni afinitet biotinilovanog enzima u odnosu na nativni enzim.Izmjereni su koeficijenti translacijske difuzije, za oba fluorogena supstrata i oba proizvoda, primjenom fluorescentne korelacijske spektroskopije.Izmjereni su koeficijenti translacijske difuzije za fluorogene supstrate i produkte enzimske hidrolize slični, u rasponu od 3,5–4,5 × 10−10 m2 s−1.Stoga poboljšanje ili usporavanje enzimske kinetike zbog razlike u translacijskoj mobilnosti supstrata i proizvoda nije toliko očigledno.