Proizvodi

Slično drugim virusima sa pozitivnim lancima RNA, tombusvirusi se repliciraju kompleksom virusne replikaze vezane na membranu (VRC).VRC se sastoji od RNA-zavisne RNA polimeraze (RdRp) kodirane virusom p92, virusnog p33 RNA šaperona i nekoliko kooptiranih proteina domaćina.Da bi postao funkcionalan RdRp nakon translacije, protein replikacije p92 treba biti inkorporiran u VRC, nakon čega slijedi njegova aktivacija.Ranije smo pokazali u testu baziranom na ekstraktu kvasca bez ćelija da je za aktivaciju RdRp virusa Tomato bushy stunt virusa (TBSV) potreban topljivi faktor(e) domaćina.U ovom članku identificiramo ćelijski protein toplotnog šoka 70 (Hsp70) kao kooptirani faktor domaćina potreban za aktivaciju N-terminalno skraćenog rekombinantnog TBSV RdRp.Osim toga, blokiranje funkcije Hsp70 zasnovano na malim molekulima inhibira sintezu RNK pomoću tombusvirusa RdRp in vitro.Nadalje, pokazujemo da neutralni fosfolipidi, odnosno fosfatidiletanolamin (PE) i fosfatidilholin (PC ), pojačavaju aktivaciju RdRp in vitro.Nasuprot tome, fosfatidilglicerol (PG) pokazuje snažan i dominantan inhibitorni efekat na in vitro aktivaciju RdRp.Takođe smo pokazali da PE i PC stimulišu RdRp-virusnu plus-lančanu RNK [(+)RNA] interakciju, dok PG inhibira vezivanje virusne RNK za RdRp.Na osnovu stimulativne naspram inhibitorne uloge različitih fosfolipida u aktivaciji RdRp tombusvirusa, predlažemo da tombusvirusi mogu koristiti lipidni sastav ciljanih subcelularnih membrana za regulaciju novog VRC sklopa tokom infekcije. RNK-polimeraza zavisna od virusa kodirana od virusa (RdRp), koji je odgovoran za sintetizaciju potomstva virusne RNK u inficiranim ćelijama nekoliko pozitivnih RNA virusa, u početku je neaktivan.Ova strategija će vjerovatno izbjeći sintezu virusne RNK u citosolu što bi brzo dovelo do indukcije RNA-pokrenutih ćelijskih antivirusnih odgovora.Tokom sastavljanja kompleksa replikaze vezane za membranu, virusni RdRp se aktivira kroz nepotpuno shvaćen proces koji čini RdRp sposobnim za sintezu RNK.Koristeći TBSV RdRp, pokazujemo da kooptirani ćelijski Hsp70 šaperon i neutralni fosfolipidi olakšavaju aktivaciju RdRp in vitro.Nasuprot tome, fosfatidilglicerol (PG) ima dominantan inhibitorni efekat na in vitro aktivaciju RdRp i RdRp-virusnu RNK interakciju, što sugeriše da membranski mikrodomen koji okružuje RdRp u velikoj meri utiče na njegovu sposobnost za sintezu RNK.Stoga, aktivacija virusnog RdRp-a vjerovatno ovisi o više komponenti domaćina u inficiranim stanicama.