Proizvodi

Diferencijacija orbitalnih fibroblasta u zrele adipocite i naknadno nakupljanje masnog tkiva prikazano je u progresiji Gravesove orbitopatije (GO).Autofagija je uključena u adipogenezu, ali malo se zna o ulozi autofagije u inicijaciji i napredovanju GO.Cilj ovog istraživanja je istražiti ulogu autofagije u patogenezi GO. Analizirani su eksplanti orbitalnog masnog/vezivog tkiva pacijenata sa GO i normalnih ispitanika, kao i izolirani orbitalni fibroblasti.Adipogeneza je inducirana korištenjem diferencirajućeg medija sa ili bez vodikovog peroksida, a autofagijom se manipulira korištenjem bafilomicina A1 i Atg5 ciljane kratke RNA (shRNA).Autofagozomi su identifikovani elektronskim mikroskopom.Ekspresija gena povezanih s autofagijom i transkripcijski faktori povezani s adipogenezom analizirani su lančanom reakcijom polimeraze i reverzne transkripcije u realnom vremenu i/ili Western blot analizom.Akumulacija lipidnih kapljica ispitana je bojenjem Oil Red O. Autofagne vakuole su bile zastupljenije u GO ćelijama nego u ne-GO ćelijama (p<0,05).Ekspresija gena povezanih sa autofagijom bila je značajno veća u GO tkivima i ćelijama nego u njihovim ne-GO kolegama, respektivno.Interleukin-1β je povećao LC3-II, p62 i Atg7 protein u GO ćelijama.Akumulacija autofagosoma je prikazana 4. dana adipogeneze i smanjena do 10. dana, zajedno sa stvaranjem lipidnih kapljica.Ekspresija LC3 i p62 proteina se povećala unutar 48 sati od diferencijacije i postepeno se smanjivala od 4. do 10. dana. Tretman bafilomicinom A1 i uništavanje Atg5 shRNA inhibirali su akumulaciju lipidnih kapljica i potisnuli ekspresiju adipogenih markera. Autofagija je povećana u GO tkivu i ćelijama u odnosu na ne-GO tkivo i ćelije, što sugerira da autofagija igra ulogu u patogenezi GO.Manipulacija autofagijom može biti terapijski cilj za GO.