Proizvodi

Nuklearna akumulacija mutiranog oblika nuklearnog proteina Lamin-A, nazvanog Progerin (PG) ili Lamin AΔ50, javlja se u Hutchinson-Gilfordovom sindromu progerije (HGPS) ili progeriji, bolesti ubrzanog starenja.Jedan od glavnih simptoma ovog genetskog poremećaja je gubitak potkožnog masnog tkiva zbog dramatične lipodistrofije. Stabilno smo inducirali ekspresiju ljudskog PG i GFP -zelenog fluorescentnog proteina- kao kontrole u 3T3L1 ćelijama koristeći lentivirusni sistem za proučavanje efekat ekspresije PG na kapacitet diferencijacije ove ćelijske linije, jednog od najčešće korišćenih adipogenih modela.Urađena je kvantitativna proteomika (iTRAQ) da bi se proučavao efekat akumulacije PG.Nekoliko moduliranih proteina je potvrđeno imunoblotingom i PCR-om u realnom vremenu.Mitohondrijalna funkcija je analizirana mjerenjem a) bazalne aktivnosti mitohondrija, b) proizvodnje superoksidnog aniona i c) individualne efikasnosti različitog kompleksa respiratornog lanca. Otkrili smo da prekomjerna ekspresija PG lentivirusnom isporukom gena dovodi do smanjenje brzine proliferacije i nedostataka u adipogenom kapacitetu u poređenju sa kontrolom.Kvantitativna proteomička analiza pokazala je da je 181 protein značajno (p<0,05) moduliran u preadipocitima koji eksprimiraju PG.Mitohondrijska funkcija je poremećena u ćelijama koje eksprimiraju PG.Konkretno, otkrili smo povećanje aktivnosti kompleksa I i prekomjernu proizvodnju superoksidnog anjona.Inkubacija sa agensima za hvatanje reaktivnih vrsta kiseonika (ROS) dovodi do smanjenja autofagne proteolize što je otkriveno omjerom LC3-II/LC3-I. PG ekspresija u 3T3L1 ćelijama potiče promjene u nekoliko bioloških procesa, uključujući strukturu citoskeleta, metabolizam lipida, kalcijum regulacija, translacija, savijanje proteina i stvaranje energije od strane mitohondrija.Naši podaci jačaju doprinos akumulacije ROS fenotipu preranog starenja i uspostavljaju vezu između mitohondrijalne disfunkcije i gubitka proteostaze u HGPS.