Proizvodi

1. Metode profilisanja metabolita su važni alati za mjerenje skupova metabolita u biološkim sistemima.Dok većina metoda profilisanja metabolita prijavljuje relativne intenzitete ili zavisi od nekoliko internih standarda koji predstavljaju sve metabolite, krajnji zahtev za kvantitativni opis skupa metabolita u biološkim ćelijama i tečnostima je određivanje apsolutne koncentracije.Ovdje izvještavamo o visokopropusnoj i osjetljivoj plinskoj hromatografiji/tandem masenoj spektrometriji (GC/MS/MS) ciljanu metodu profiliranja metabolita koja omogućava apsolutnu kvantifikaciju svih otkrivenih metabolita.Metoda se zasniva na derivatizaciji metil hloroformata i kvantifikaciji dodavanjem uzoraka sa standardima metabolita koji su odvojeno derivatizovani deuterisanim reagensima za derivatizaciju.Tradicionalna elektronska udarna jonizacija zamijenjena je pozitivnom kemijskom ionizacijom jer ova druga u mnogo većoj mjeri čuva molekularni jon i druge fragmente velike molekularne težine.To je olakšalo odabir jedinstvenih MS/MS prijelaza među mnogim metabolitima koji se koeluiraju.Trenutno, nova GC/MS/MS metoda obuhvata 67 uobičajenih primarnih metabolita od kojih većina pripada grupama amino i neamino organskih kiselina.Primjenjivost metode pokazujemo na uzorcima urina i seruma.Metoda je značajno poboljšanje postojeće metodologije za kvantitativno GC/MS profilisanje metabolita aminokiselina i neamino organskih kiselina.

2,24S-hidroksiholesterol (24OHC) i 27-hidroksiholesterol (27OHC) su dva strukturno slična oksisterola različitog porijekla - prvi se gotovo isključivo formira u mozgu, a drugi se formira u manjoj mjeri u mozgu nego u većini drugih organa.HIPOTEZA KOJA SE TESTIRATI: Oštećenje neurona i/ili demijelinizacija uzrokuje povećan protok 24OHC iz mozga u cerebrospinalnu tekućinu (CSF), dok defekt krvno-moždane barijere uzrokuje povećan fluks 27OHC iz cirkulacije u CSF. Razrjeđivanje izotopa- spektrometrija je korišćena za ispitivanje dva oksisterola u CSF i plazmi kod više od 250 pacijenata sa različitim neurološkim i gerijatrijskim bolestima. Različite bolesti su mnogo više uticale na nivoe CSF-a dva oksisterola nego na nivoe u plazmi.Pacijenti sa aktivnim demijelinizirajućim bolestima imali su povećane nivoe 24OHC u likvoru sa relativno visokim odnosom 24OHC/27OHC.Pacijenti s meningitisom općenito su imali visoke razine oba steroida sa niskim omjerom 24OHC/27OHC.Pacijenti sa Alchajmerovom bolešću imali su neznatno povećane nivoe 24OHC u CSF sa manjim povećanjem 27OHC.Pacijenti sa multiplom sklerozom su imali tendenciju da imaju više nivoe 24OHC tokom aktivnih perioda sa visokim odnosom 24OHC/27OHC. Mjerenja dva oksisterola u CSF i plazmi mogu značajno doprinijeti postojećim biohemijskim metodama za procjenu neuroloških bolesti.