Proizvodi

Topologija membrane domene kanala kolicin E1 proučavana je fluorescentnim rezonantnim prijenosom energije (FRET).FRET je uključivao genetski kodiranu fluorescentnu aminokiselinu (kumarin) kao donora i selektivno označeni cisteinski ostatak vezan sa DABMI (4-(dimetilamino)fenilazofenil-4'-maleimid) kao FRET akceptorom.Fluorescentni kumarinski ostatak je ugrađen u protein preko ortogonalnog para tRNA/aminoacil-tRNA sintetaze koji je omogućio selektivnu inkorporaciju u bilo koje mjesto unutar domene kolicin kanala.Svaka varijanta sadržavala je stop (TAG) mutaciju za ugradnju kumarina i mutaciju cisteina (TGT) za vezivanje DABMI.Šest međuhelikalnih razmaka unutar spirala 1-6 je određeno korištenjem FRET analize i za rastvorljivo i za membranski vezano stanje.FRET podaci su pokazali velike promjene u interhelikalnim udaljenostima između spirala 3-6 nakon povezivanja membrane dajući novi uvid u strukturu domene kanala vezanu za membranu.Općenito, interhelička efikasnost kumarina-DABMI FRET smanjena je nakon vezivanja za membranu, nadovezujući se na krovni model za kolicinski kanal.Razvijen je probni model za zatvoreno stanje domene kanala na osnovu trenutnih i prethodno objavljenih FRET podataka.Model sugerira kružni raspored spirala 1-7 u smjeru kazaljke na satu od ekstracelularne strane i membranske međufazne veze spirala 1, 6, 7 i 10 oko centralne transmembranske ukosnice koju formiraju spirale 8 i 9.