Proizvodi

Patogeni molekularni putevi kod cirotičnih bolesti jetre kao što su virus hepatitisa C (HCV), autoimuni hepatitis (AIH) i primarna bilijarna ciroza (PBC) su slabo okarakterisani.Diferencijalno izraženi geni su često važni u patogenezi bolesti.Suptrativna hibridizacija supresije (SSH) je pristup koji obuhvata čitav genom koji obogaćuje za različito eksprimirane transkripte mRNA.Cilj nam je bio da napravimo nova opažanja diferencijalne ekspresije gena kod ciroze koristeći SSH u kombinaciji s kvantitativnom lančanom reakcijom polimeraze reverzne transkriptaze u realnom vremenu (RT-PCR).Transkriptomi jetre kod HCV ciroze, AIH ciroze, PBC i neoboljelog tkiva jetre ispitivani su SSH.Rezultirajući komplementarni klonovi DNK (cDNA) su ponovo pregledani za diferencijalnu ekspresiju dot-blot hibridizacijom i zatim sekvencionirani.Ekspresija odabranog gena je kvantifikovana RT-PCR u realnom vremenu.Nakon SSH, 694 klona je ponovo pregledano na diferencijalnu ekspresiju gena, od kojih je 145 sekvencionirano i utvrđeno je da potječe od 89 različitih gena.Sedam klonova je bilo homologno samo sa sekvencama ekspresiranih oznaka sekvence (EST) koje kodiraju gene koji nemaju poznatu funkciju.Povećana ekspresija četiri gena potvrđena je RT-PCR-om u realnom vremenu: transmembranski 4 član superfamilije 3 (tetraspanin CO-029) u svim oblicima ciroze, protein koji interaguje s ježem (HIP) u AIH cirozi i hitinaza 3-like-1 (HC gp-39 ili ykl-40) i ponavljanje arginin-glutaminske kiseline (RERE) kod HCV ciroze.U svim ispitivanim tkivima uočeni su polimorfizmi gena RERE i varijante spajanja.Up-regulacija tetraspanina CO-029 prvenstveno je bila lokalizirana na žučne dukularne stanice.U zaključku, nova zapažanja diferencijalne ekspresije gena kod ljudske ciroze napravljena su korištenjem SSH kao primarnog alata za otkrivanje.Naročito su opravdana dalja istraživanja gena RERE i njegovih proizvoda u bolestima jetre povezanih sa HCV.