Proizvodi

Oksidativno oštećenje DNK baza obično rezultira stvaranjem oksidiranih purina, posebno 7,8-dihidro-8-oksoguanina (8-oxoG) i 7,8-dihidro-8-oksoadenina (8-oxoA), pri čemu je prvi dobro poznata mutagena lezija.Budući da je 8-oxoG lako podložan daljoj oksidaciji u poređenju sa normalnim bazama, in vitro je ispitivano umetanje baze tokom sinteze DNK nasuprot oksidovanom obliku 8-oxoG.Sintetički šablon koji sadrži jednu 8-oxoG leziju prvo je tretiran različitim jednoelektronskim oksidantima ili u uslovima singletnog kiseonika, a zatim je podvrgnut produžetku prajmera katalizovanom Klenowovim fragmentom egzo- (Kf exo-), DNA polimerazom alfa (pol alfa) timusa teladi ) ili humana DNK polimeraza beta (pol beta).U skladu s prethodnim izvještajima, dAMP i dCMP su umetnuti selektivno nasuprot 8-oxoG sa sve tri DNK polimeraze.Zanimljivo je da je nađeno da oksidacija 8-oxoG indukuje dAMP i dGMP inserciju nasuprot leziji pomoću Kf egzo- uz prolaznu inhibiciju ekstenzije prajmera koja se javlja na mestu modifikovane baze.Nadalje, lezija predstavlja blok tokom sinteze DNK pomoću pol alfa i pol beta.Eksperimenti sa 8-oxoA-modificiranim šablonskim oligonukleotidom pokazuju da i 8-oxoA i oksidirani oblik 8-oxoA direktno ubacuje dTMP od strane Kf exo-.Masena spektrometrijska analiza oligonukleotida koji sadrže 8-oxoG prije i nakon oksidacije sa IrCl62-su konzistentna sa oksidacijom primarno 8-oxoG mjesta, što rezultira formiranjem gvanidinohidantoinskog dijela kao glavnog proizvoda.Nisu dobijeni dokazi za formiranje abazičnih lokacija.Ovi rezultati pokazuju da oksidirani oblik 8-oxoG, vjerovatno gvanidinohidantoin, može usmjeriti pogrešno čitanje i pogrešno umetanje dNTP-a tokom sinteze DNK.Ako bi se takav proces dogodio in vivo, to bi predstavljalo točkastu mutagenu leziju koja vodi do G-->T i G-->C transverzija.Međutim, odgovarajući oksidirani oblik 8-oxoA prvenstveno pokazuje ispravnu inserciju T tokom sinteze DNK sa Kf exo-.