Proizvodi

Preko 70% glioma niskog stepena ima heterozigotnu R132H mutaciju u genu koji kodira izocitrat dehidrogenazu 1 (IDH1).Ovo daje enzimu novu sposobnost da konvertuje α-ketoglutarat u 2-hidroksiglutarat, što na kraju dovodi do tumorigeneze.Glavni izvor proizvodnje 2-hidroksiglutarata je glutamin, koji je kod raka također izvor anapleroze ciklusa trikarboksilne kiseline (TCA).Alternativni izvor anapleroze je fluks piruvata preko piruvat karboksilaze (PC), što je uobičajen put u normalnim astrocitima.Cilj ove studije bio je da se utvrdi da li PC služi kao izvor TCA anapleroze u IDH1 mutantnim ćelijama u kojima se glutamin koristi za proizvodnju 2-hidroksiglutarata. Istraživani su imortalizovani normalni ljudski astrociti projektovani da eksprimiraju heterozigotni mutant IDH1 ili IDH1 divljeg tipa.Fluks piruvata preko PC i preko piruvat dehidrogenaze (PDH) određen je korišćenjem spektroskopije magnetne rezonance da bi se ispitalo obeležavanje [2-¹³C]glutamata i glutamina izvedene iz glukoze ¹³C-labe.Za ispitivanje ekspresije i aktivnosti relevantnih enzima korišteni su testovi aktivnosti, RT-PCR i Western blotting.Podaci Atlasa genoma raka (TCGA) su analizirani kako bi se procijenila ekspresija enzima u uzorcima humanog glioma. U poređenju sa ćelijama divljeg tipa, mutantne IDH1 ćelije su značajno povećale frakcijski protok kroz PC.Ovo je povezano sa značajnim povećanjem PC aktivnosti i ekspresije.Istovremeno, aktivnost PDH je značajno smanjena, vjerovatno posredovana značajno povećanom inhibitornom fosforilacijom PDH PDH kinazom 3. U skladu sa zapažanjima u ćelijama, analiza TCGA podataka je pokazala značajno povećanje ekspresije PC u uzorcima humanog glioma koji eksprimiraju mutantne IDH u poređenju sa divljim tip IDH. Naši nalazi sugeriraju da promjene u PC i PDH mogu biti važan dio ćelijske adaptacije na IDH1 mutaciju i mogu poslužiti kao potencijalni terapeutski ciljevi.